一种用于猪肠道修复的修复剂的制作方法

本发明属于动物医学
技术领域：
，尤其涉及一种用于猪肠道修复的修复剂。
背景技术：
：随着我们国家经济实力的不断发展，人民的生活水平得到了不断的提升，猪肉的需要也不断的加大。我国是世界上猪肉产量和消费量最大的国家，养猪业的健康发展对于国民经济的宏观调控具有重要的作用。其中，仔猪的成活率是影响猪场经济效益和猪肉价格的重要因素。在我国的猪肉养殖中，断奶仔猪腹泻是影响仔猪成活率的最主要原因。我国断奶仔猪的腹泻发病率通常大约为20%-30%，断奶仔猪的病死率为10-15%。仔猪腹泻多是由于仔猪肠道黏膜上皮组织损坏所导致的。肠上皮的修复有两种方式：一种方式是与受损表面毗邻的细胞进行迁移以覆盖受损区域；第二种方式是通过细胞增殖取代受损细胞。因此，寻找能够存进猪肠道上皮细胞增殖和上皮细胞迁移的物质，可以有效的修复肠上皮损伤，从而有效的减少仔猪的腹泻和提高仔猪的成活率。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种用于猪肠道修复的修复剂。为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：本发明提供了复合多肽在制备猪肠道修复剂中的用途，所述复合多肽的制备原料为长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉。优选地，所述复合多肽的制备方法如下：（1）将长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉按照1：1的比例粉碎混合，加入15倍量的水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入3wt%枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。此外，本发明提供了复合多肽在制备促进猪小肠上皮细胞增殖促进剂中的用途，所述复合多肽的制备方法如下：（1）将长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉按照1：1的比例粉碎混合，加入15倍量的水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入3wt%枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。此外，本发明提供了复合多肽在制备促进猪小肠上皮细胞迁移促进剂中的用途，所述复合多肽的制备方法如下：（1）将长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉按照1：1的比例粉碎混合，加入15倍量的水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入3wt%枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。此外，本发明提供了一种用于猪肠道修复的修复剂，所述修复剂为一种复合多肽，所述复合多肽的制备原料为长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉。优选地，所述复合多肽的制备方法如下：（1）将长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉按照1：1的比例粉碎混合，加入15倍量的水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入3wt%枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。此外，本发明提供了一种用于促进猪小肠上皮细胞增殖的促进剂，所述促进剂为一种复合多肽，所述复合多肽的制备原料为长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉；所述复合多肽的制备方法如下：（1）将长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉按照1：1的比例粉碎混合，加入15倍量的水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入3wt%枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。除此之外，本发明提供了一种用于促进猪小肠上皮细胞迁移的促进剂，所述促进剂为一种复合多肽，所述复合多肽的制备原料为长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉；所述复合多肽的制备方法如下：（1）将长额刺糠虾虾肉和小红糠虾虾肉按照1：1的比例粉碎混合，加入15倍量的水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入3wt%枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。本发明的有益效果在于：本发明使用长额刺糠虾和小红糠虾为原料制备出了用于猪肠道修复的复合多肽，该复合多肽能够有效的促进猪小肠上皮细胞的增殖，并且能够促进猪小肠上皮细胞的迁移，从而能够有效的修复猪肠道。附图说明图1复合多肽对于猪小肠上皮细胞ipec-j2细胞增殖的影响图2复合多肽对于猪小肠上皮细胞ipec-j2细胞迁移的影响。具体实施方式实施例1（1）将50g长额刺糠虾虾肉和50g小红糠虾虾肉粉碎混合，加入1500ml水，制成匀浆液，灭菌备用；（2）加入60g枯草芽孢杆菌，35℃，ph6,30r/min，发酵48h；（3）发酵完成后高温高压灭菌20min；（4）冷却至室温后，将灭菌后的发酵液3500rpm离心20min；（5）取上清，使用1um的超滤膜进行过滤，得到多肽液；（6）冷冻干燥，得到长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽。实施例2长额刺糠虾和小红糠虾的复合多肽在促进猪肠道上皮细胞增殖中的应用。（1）将1×104ipec-j2细胞接种于96孔板中，过夜培养后，加入复合蛋白酶进行处理（0ug/ml，10ug/ml，25ug/ml，50ug/ml）；（2）处理48h后使用cck-8试剂检测od值，结果如表1和图1所示。表1cck-8检测od值（统计学差异如图1所示）0μg/ml10μg/ml25μg/ml50μg/ml24h0.323±0.0210.346±0.0230.444±0.0130.448±0.01948h0.485±0.0220.528±0.0210.725±0.0280.792±0.019从图1和表1可以看出本发明所制备的复合多肽能够明显促进猪小肠上皮细胞ipec-j2的增殖，且差异具有统计学意义。实施例3（1）将ipec-j2细胞接种于6孔板中，当细胞密度达到85%时，使用200ul的枪头在培养孔的垂直方向轻轻的滑过贴壁的细胞层，使用pbs将脱离的细胞清除；（2）加入含有0μg/ml和50μg/ml的培养基，分别在0h和48h使用倒置显微镜进行拍照，实验结果如图2所示。从图2可以看出，复合多肽能够显著的促进猪小肠上皮细胞ipec-j2的迁移能力。综上所述，本发明所制备的复合多肽一方面可以通过促进猪小肠上皮细胞增殖来替换损伤的细胞，另一方面可以通过促进猪小肠上皮细胞的迁移来覆盖受损区域，因此，可将其用于制备修复猪肠道损伤的修复剂来减少断奶仔猪的腹泻，提高断奶仔猪的存活率。当前第1页1 2 3 

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