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您当前的位置： 一种益生菌微囊及其制备方法和应用与流程
2021-02-02 18:02:28|
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起点商标网 本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及一种益生菌微囊及其制备方法和应用。
背景技术：
：正常的微生物群对维持机体的生理功能发挥着积极作用，任何物理或化学因素所导致的微生态环境失衡都会对机体的健康造成影响。皮肤作为人体表面积最大的器官，同样栖居着多种微生物群。皮肤微生态系统是各类微生物、皮肤表面的组织细胞及各种分泌物、微环境等共同组成的整体，它们维持着皮肤微生态平衡，在皮肤表面形成第一道生物屏障，具有重要的生理作用。越来越多的研究表明，诸多皮肤问题与皮肤微生态失调相关，例如以皮肤屏障功能受损为典型代表的特应性皮炎的严重程度与葡萄球菌属定殖增加以及表面微生物种类减少呈正相关；痤疮的发生与痤疮丙酸杆菌的增加以及皮肤表面有益微生物的减少有关。迄今为止，已经有不少产品通过调节皮肤微生态或提供促进皮肤有益共生菌生长的微环境等达到维持、改善或促进皮肤健康的目的。益生菌是指一类对宿主健康产生促进作用的微生物，在世界范围内被消费者接受，在医药、食品、保健品及农业等领域有着广泛的应用。近年来，许多功能性强的食品逐渐被应用到化妆品领域中，益生菌也不例外，为化妆品领域带来了新的发展方向，其通过调节皮肤微生态平衡从而达到维持或改善皮肤健康的目的。目前，益生菌类化妆品可以分为三类：(1)外用益生菌：在化妆品中，使用活的益生菌或益生菌的发酵萃取物，临床研究表明，外用益生菌可以通过影响皮肤微生物的组成，起到改善皮肤健康的作用。通过外用活益生菌，可以通过代谢产物、占位竞争等方式抑制皮肤表面有害菌的生长；通过外用益生菌的发酵萃取物，包含有多糖及氨基酸等，可以滋养皮肤、保护皮肤细胞等；(2)外用益生元：益生元是指可以被皮肤共生菌吸收的特定营养物质，可以促进皮肤共生菌的繁殖和生长，利于外用益生菌在皮肤表面的定殖，从而利于宿主皮肤健康；(3)益生菌酸奶类化妆品，如用益生菌酸奶制作的面膜，它含有多种氨基酸和维生素，起到滋养皮肤的作用。目前，与食品中添加活益生菌不同，在化妆品中大多数使用的是益生菌的碎片或萃取物，虽然对皮肤起到重要的生理功能，但要实现足够的抑制皮肤表面有害菌的生长繁殖和分泌胞外多糖保护皮肤等的功效，还需要在化妆品中添加“足量的”和“活的”益生菌。然而，益生菌对外界的不利环境非常敏感，氧气、温度和湿度等对益生菌的存活有很大影响，环境变化可导致其在生产、运输和销售过程中活菌数大幅减少。此外，当益生菌输入到皮肤表面时，容易受到皮肤分泌物的影响，难以保持足够的活益生菌定殖于皮肤，从而不利于发挥护肤作用。微囊化技术是一种包埋益生菌的有效手段，其采用天然或合成的高分子材料为囊材，通过化学、物理等方法将活性物质包裹起来，形成的微型胶囊。将益生菌微囊化之后，能在一定程度上使其与外界环境隔离，提高其对不利环境的耐受性，提高贮存过程中的稳定性，从而使益生菌获得较高的存活率。中国专利cn104856924b公开了“一种外用益生菌微胶囊的制备方法”，其特征在于利用海藻酸钠和葛仙米提取液对双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌进行了微胶囊化包埋，获得了湿胶囊，其主要缺点在于：囊材为海藻酸钠和葛仙米提取液，成分较单一，且葛仙米提取液成分不明确；微囊化过程采用单层包埋，微囊骨架过于疏松，后期经过口服或者在贮存过程中，微囊容易破裂，导致菌体泄漏到微囊外部；该专利的产品以湿胶囊的形式存在，不利于微囊后期的保存。中国专利cn106727263a公开了“皮肤微生态改善制剂及其制备方法”，其特征在于将益生菌粉、益生菌发酵液及常规助剂进行压片，得到了益生菌片，具有保湿、柔肤等功能，其缺点在于：益生菌对外界的不利环境非常敏感，且未经过包埋，当益生菌输入到皮肤表面时，容易受到皮肤分泌物的影响，难以保持足够的活益生菌定殖于皮肤；此外，该专利只研究了该益生菌片在室温、贮存温度下30天内的益生菌存活率，保质期过短，不能说明该产品中益生菌的稳定性。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供了一种益生菌微囊及其制备方法，技术方案具体如下：获得混合菌悬液；将益生元、天然多聚物、海藻酸钠加入所述混合菌悬液中混合，经乳化和一次固化步骤，形成初级微囊；将所述初级微囊置于壳聚糖溶液中二次固化。具体地，所述混合菌悬液包括鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和/或罗伊氏乳杆菌。具体地，所述益生元包括低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖或菊糖中的一种或多种。具体地，所述天然多聚物包括透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸、小核菌胶的一种或多种。进一步地，所述乳化为在大豆油中乳化。进一步地，所述一次固化为用氯化钙溶液进行固化。本发明还提出了如前任一制备方法制得的益生菌微囊。本发明还提出了一种益生菌微囊，包括：囊芯，包括益生菌和益生元；第一囊材，包括天然多聚物和海藻酸钠；第二囊材，包括壳聚糖。本发明还提出了如前所述的益生菌微囊经冷冻干燥制得的益生菌微囊冻干粉。本发明还提出了如前任一所述的益生菌微囊在保湿、祛痘产品中的应用，例如可以是具有保湿、祛痘作用的化妆品。本发明还提出了一种化妆品，所述化妆品包括如前所述益生菌微囊的或益生菌微囊冻干粉。其中，由于本发明的微囊或冻干粉具有良好的稳定性，可与溶媒搭配直接使用或作为化妆品成分应用于化妆品领域。进一步地，本发明提出的益生菌微囊化冻干粉的制备方法，技术方案如下：(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵液按照体积比混合均匀，离心后获得湿菌泥，无菌生理盐水洗涤2次，并用无菌生理盐水稀释得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：将益生元、天然多聚物、海藻酸钠加入到上述混合菌悬液中，混合均匀形成胶体溶液；将该胶体溶液加入到大豆油中乳化，然后加入固化液，形成初级微囊；将初级微囊置于壳聚糖溶液中进一步固化，用无菌生理盐水洗涤3次，获得皮肤益生菌微囊；(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊经过预冻、真空冷冻干燥，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。进一步地，鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌扩大培养时，发酵温度为30℃-37℃，发酵过程中控制ph为6.0-7.0，发酵周期为48h-60h。进一步地，将各益生菌发酵液按照体积比1份：1/4-3份：1/2-4份混合均匀，8000rpm-12000rpm，离心10min-20min，获得湿菌泥，并用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液。进一步地，在混合菌悬液中添加益生元、天然多聚物、海藻酸钠，无菌条件下，150rpm-250rpm搅拌20min-30min至均匀，得胶体溶液。胶体溶液中，益生元的浓度为1％-5％，海藻酸钠的浓度为1％-10％，天然多聚物的浓度为0.01％-1.5％。进一步地，所述益生元可包括低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖或菊糖的一种或多种任意比例的组合。所述天然多聚物为透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸、小核菌胶一种或多种任意比例的组合。可选地，所述透明质酸浓度为0.05％-1.5％，所述银耳多糖浓度为0.05％-1.0％，所述聚谷氨酸为0.05％-0.8％，所述小核菌胶为0.01％-0.1％进一步地，将胶体溶液缓慢加入到大豆油，大豆油中吐温80的浓度为0.5％-1.0％，胶体溶液与大豆油的比例为1:2-1:5，无菌条件下200rpm-600rpm，乳化15min-30min，得乳化液。进一步地，将固化液加入到乳化液中，乳化液与固化液的体积比为1:1-1:4，固化液为氯化钙，浓度为1％-3.5％，无菌条件下200rpm-600rpm，固化10min-20min，得初级微囊。进一步地，将初级微囊置于壳聚糖溶液中进一步固化5min-15min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于水杨酸中得到，浓度为1％-10％，溶解调节壳聚糖溶液的ph为6.0。进一步地，皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3h-6h；真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-40℃至-60℃，真空度1pa-8pa，冷冻干燥24h-36h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。本发明的技术方案获得的有益效果如下：1.本发明通过对皮肤益生菌微胶囊化，进行双层包埋，克服了化妆品中益生菌比较脆弱、容易失活的缺点，提高了益生菌耐受不利环境的能力，延长了益生菌化妆品的保质期；2.本发明中采用了透明质酸、聚谷氨酸、银耳多糖和/或小核菌胶天然多聚物材料，这些材料具有双重功效：(1)具有无毒、成膜性好、生物相容性等优点，可作为益生菌微囊化的囊材使用，且多种天然多聚物复合使用，具有包埋效果更显著的特点；(2)和益生菌协同使用，具有良好的保湿、祛痘、维持皮肤微生态平衡的护肤效果；3.本发明中添加了低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖和/或菊糖等益生元生长促进因子，利于益生菌在皮肤中的定殖与繁殖生长，使其更好的发挥护肤作用。具体实施方式以益生菌为活性成分的化妆品中，许多仅仅是直接添加益生菌或益生菌的代谢产物，由于益生菌未经过包埋，在贮存和使用过程中容易失活，具有难以保持足够的活益生菌定殖于皮肤，继而发挥护肤功效的问题；而且，一些对益生菌的包埋技术中，还是存在包埋材料单一、包埋率及益生菌存活率不够理想的问题。有鉴于此，本发明提供了新的皮肤益生菌微囊化或其冻干粉及其制备方法。除特别指明，本发明的原料或试剂均可商业获得或通过现有技术方式获得。本发明实施例中部分材料如下：低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、菊糖来自保龄宝生物股份有限公司；透明质酸(200-1000kda)、聚谷氨酸(800-1500kda)、银耳多糖(50-200kda)、小核菌胶(2500-3000kda)来自华熙生物科技股份有限公司；海藻酸钠来自青岛明月海藻集团有限公司；壳聚糖来自浙江金壳药业股份有限公司。下面结合具体实施实例对本发明做进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。实施例1(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为30℃，发酵过程中控制ph为6.0，发酵周期为48h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1/4份：1/2份混合均匀，8000rpm，离心10min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1％菊糖、1.0％银耳多糖、1％海藻酸钠，无菌条件下，150rpm搅拌20min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:2缓慢加入到大豆油(含有0.5％吐温80)，无菌条件下200rpm，乳化15min，得乳化液；将1％氯化钙溶液按照体积比为1:1加入到乳化液中，无菌条件下200rpm固化10min，得初级微囊；将初级微囊置于1％壳聚糖溶液中(壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于水杨酸中得到，浓度为1％-10％，溶解调节壳聚糖溶液的ph约为6.0，下同)进一步固化5min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为银耳多糖、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为菊糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-40℃，真空度1pa，冷冻干燥24h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例2(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为37℃，发酵过程中控制ph为7.0，发酵周期为60h；各益生菌发酵液按照体积比1份：3份：4份混合均匀，12000rpm，离心20min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加5％低聚半乳糖、0.05％聚谷氨酸、10％海藻酸钠，无菌条件下，250rpm搅拌30min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:5缓慢加入到大豆油(含有1.0％吐温80)，无菌条件下600rpm，乳化30min，得乳化液；将3.5％氯化钙溶液按照体积比为4:1加入到乳化液中，无菌条件下600rpm固化20min，得初级微囊；将初级微囊置于10％壳聚糖溶液中进一步固化15min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为聚谷氨酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻6h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-60℃，真空度8pa，冷冻干燥36h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例3(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、0.075％小核菌胶、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为小核菌胶、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例4(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为31.5℃，发酵过程中控制ph为7.0，发酵周期为58h；各益生菌发酵液按照体积比1份：3份：4份混合均匀，8000rpm，离心20min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1.75％低聚半乳糖、0.4％透明质酸、8％海藻酸钠，无菌条件下，250rpm搅拌22min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.65％吐温80)，无菌条件下500rpm，乳化15min，得乳化液；将1％氯化钙溶液按照体积比为3:1加入到乳化液中，无菌条件下500rpm固化12min，得初级微囊；将初级微囊置于3％壳聚糖溶液中进一步固化13min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3.5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-55℃，真空度1pa，冷冻干燥24h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例5(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为35℃，发酵过程中控制ph为6.8，发酵周期为50h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1/4份：2份混合均匀，9000rpm，离心13min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加4％低聚异麦芽糖、0.8％聚谷氨酸、2.5％海藻酸钠，无菌条件下，180rpm搅拌28min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:2缓慢加入到大豆油(含有1.0％吐温80)，无菌条件下300rpm，乳化28min，得乳化液；将3％氯化钙溶液按照体积比为1.5:1加入到乳化液中，无菌条件下300rpm固化18min，得初级微囊；将初级微囊置于8％壳聚糖溶液中进一步固化8min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为聚谷氨酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚异麦芽糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-42℃，真空度6.5pa，冷冻干燥30h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例6(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为37℃，发酵过程中控制ph为6.0，发酵周期为52h；各益生菌发酵液按照体积比1份：2份：1/2份混合均匀，11000rpm，离心18min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加5％低聚果糖、0.8％银耳多糖、1％海藻酸钠，无菌条件下，220rpm搅拌20min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:4缓慢加入到大豆油(含有0.9％吐温80)，无菌条件下450rpm，乳化18min，得乳化液；将3.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下450rpm固化16min，得初级微囊；将初级微囊置于10％壳聚糖溶液中进一步固化12min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为银耳多糖、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4.5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-58℃，真空度3.5pa，冷冻干燥28h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例7(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为30℃，发酵过程中控制ph为7.0，发酵周期为60h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1份：1份混合均匀，10000rpm，离心10min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1％低聚半乳糖、2％低聚异麦芽糖、0.05％透明质酸、0.1％小核菌胶、2％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌20min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:4缓慢加入到大豆油(含有0.7％吐温80)，无菌条件下300rpm，乳化20min，得乳化液；将2％氯化钙溶液按照体积比为2:1加入到乳化液中，无菌条件下200rpm固化10min，得初级微囊；将初级微囊置于1％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、小核菌胶、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖、低聚异麦芽糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-45℃，真空度4pa，冷冻干燥30h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例8(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为35℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为50h；各益生菌发酵液按照体积比1份：3份：2份混合均匀，12000rpm，离心18min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1％低聚半乳糖、1.5％低聚果糖、1％低聚异麦芽糖、1.5％菊糖、0.2％透明质酸、0.05％银耳多糖、0.5％聚谷氨酸、0.05％小核菌胶、1％海藻酸钠，无菌条件下，250rpm搅拌23min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:5缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下500rpm，乳化18min，得乳化液；将3.5％氯化钙溶液按照体积比为3:1加入到乳化液中，无菌条件下500rpm固化18min，得初级微囊；将初级微囊置于8％壳聚糖溶液中进一步固化12min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸、小核菌胶、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、菊糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3.5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度6pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例1(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、0.075％小核菌胶、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，囊材为小核菌胶、海藻酸钠，囊心为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例2(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例3(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1.5％透明质酸、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例4(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例5(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、1.5％胶原、1％明胶、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为明胶、胶原、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌、低聚果糖。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例6(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚木糖、小核菌胶0.075％、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌、低聚木糖。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例7(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％大豆低聚糖、小核菌胶0.075％、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌、大豆低聚糖。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。皮肤益生菌微囊化冻干粉包埋率及活菌数测试实验方法：分别将实施例和对比例制得的皮肤益生菌微囊化冻干粉1g置于9ml溶媒液(氯化钠0.9％，1％水杨酸，ph5.5-6.5)中，于37℃恒温水浴震荡30min后，将混悬液梯度稀释，采用平板菌落计数法进行活菌计数，将所得活菌数乘以皮肤益生菌微囊化冻干粉的总重量为n0，微胶囊化前的混合菌悬液中的活菌数记为n1，包埋率计算公式如下：包埋率(％)＝n0/n1×100％活菌数(cfu/g)：1g皮肤益生菌微胶囊冻干粉中所包埋的活菌数。实验结论：从表1可知，本发明制得的皮肤益生菌微囊化冻干粉具有良好的包埋率。通过分析各实施例与对比例1，这说明了海藻酸钠和壳聚糖的双层包埋作用，克服了单层包埋微囊疏松的问题；通过对比各实施例与对比例2可知，天然多聚物，如透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸和/或小核菌胶，在包埋益生菌时的使用，能与海藻酸钠、壳聚糖发挥协同作用，显著提高包埋率；通过对比各实施例和对比例3、对比例4、对比例5可知，在包埋益生菌时，益生元、天然多聚物、海藻酸钠能和壳聚糖发挥协同作用，利于包埋率的提高。表1皮肤益生菌微囊化冻干粉包埋率及活菌样品包埋率(％)活菌数(cfu/g)实施例1896.61×109实施例2919.75×109实施例3961.54×1010实施例4919.08×109实施例5908.23×109实施例6941.36×1010实施例7886.42×109实施例8921.15×1010对比例1305.81×108对比例2441.05×109对比例3523.88×109对比例4357.04×108对比例5482.76×109对比例6387.81×108对比例7409.50×108皮肤益生菌微胶囊冻干粉存活率测试实验方法：上述实施例和对比例制得的皮肤益生菌微囊化冻干粉进行稳定性实验，各样品在室温条件下保藏0个月、1个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月，于不同时间点，取样测定样品中益生菌活菌数，每样品3平行，活菌数计方法同包埋率测定计数方法。实验结论：由表2可知，本发明实施例获得的皮肤益生菌微囊化冻干粉在室温贮存过程中，较对比例，益生菌具有良好的稳定性，24个月后，益生菌存活率在70％以上；相对的，对比例制备的益生菌微囊化冻干粉，24个月后，益生菌存活率较差，约为10％-30％。表2皮肤微囊化冻干粉在室温贮存过程中的存活率功效测试a.保湿功效实验方法：选择160名年龄段在30-50岁的皮肤干燥的志愿者(皮肤含水量小于10％)，将上述志愿者随机分为空白对照组，实施例组1-8组，对比例组1-7组，每组10人。受试者统一清洁双手前臂内侧，自然干燥30min后，在双手前臂内侧分别选取4cm2的区域作为受试区，实施例组前臂内侧涂抹各实施例皮肤益生菌微囊化冻干粉溶媒液1.0ml(每1.0ml溶媒含有皮肤益生菌微囊化冻干粉0.5mg)，对比例组前臂内侧涂抹各对比例皮肤益生菌微囊化冻干粉溶媒液1.0ml(每1.0ml溶媒含有皮肤益生菌微囊化冻干粉0.5mg)，分别涂抹后于0.5h、1h、3h、6h时间点测试受试者前臂内侧受试区的皮肤含水量变化，空白对照组前臂内侧不涂抹护肤品。取受试者双手前臂内侧受试区的皮肤含水量的平均值作为该受试者的皮肤含水量的测试结果，再取各组受试者的皮肤含水量测试结果的平均值作为该组受试者皮肤含水量的测试结果。实验结论：通过表3可知，空白对照组中志愿者皮肤中的含水量变化不明显，使用供试品6h后，实施例组和对比例组志愿者的皮肤含水量均有所提高，但通过分析，前者志愿者的皮肤含水量明显高于后者，这说明本发明制备的皮肤益生菌微囊化冻干粉具有良好的保湿功效。表3受试者皮肤含水量测试结果组别0.5h1h3h6h空白对照30.7132.1628.6126.31实施例151.5046.4843.7539.45实施例254.3550.8947.7845.53实施例361.5257.7252.3350.67实施例454.5251.4346.2144.60实施例552.5149.2046.4141.36实施例656.1851.5749.8246.62实施例753.7250.5148.9543.55实施例859.8255.1150.2448.76对比例145.1741.7836.4529.13对比例247.2142.4537.2332.45对比例350.4444.1839.8733.28对比例442.5640.9235.1628.45对比例549.1943.3240.6534.18对比例641.3537.5634.1327.12对比例740.7136.6333.3426.95b.祛痘功效实验方法：选择170名面部皮肤明显有痘痘的志愿者，将上述志愿者随机分为空白对照组(不使用任何祛痘产品)，实施例组1-8组，对比例组1-7组，市售祛痘产品组，每组10人，分别长期试用相对应受试样品，测试周期为28天。受试者早晚洁面后，取适量受试样品涂于面部，特别是痘痘部位，轻轻按摩至吸收。评价方法：通过皮肤面部分析仪和面部图像分析软件对受试者使用前和使用后进行拍照分析，计算痘痘的减少量；若减少80％或以上，则为优良；若减少60％-80％，则为良好；若减少40％-60％，则为较好；若减少40％以下，则为较差。实验结论：通过表4可知，本发明实施例中的皮肤益生菌微囊化冻干粉较对比例、空白对照及市售祛痘产品，具有明显的祛痘效果。表4受试者祛痘测试结果样品痘痘减少量祛痘功效空白对照30％较差市售祛痘产品65％良好实施例171％良好实施例282％优良实施例388％优良实施例483％优良实施例575％良好实施例691％优良实施例773％良好实施例886％优良对比例133％较差对比例248％较好对比例353％较好对比例438％较差对比例550％较好对比例635％较差对比例737％较差尽管以上对本申请的实施方案进行了描述，但本申请并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本申请要求保护之列。当前第1页1 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技术领域：
，具体涉及一种益生菌微囊及其制备方法和应用。
背景技术：
：正常的微生物群对维持机体的生理功能发挥着积极作用，任何物理或化学因素所导致的微生态环境失衡都会对机体的健康造成影响。皮肤作为人体表面积最大的器官，同样栖居着多种微生物群。皮肤微生态系统是各类微生物、皮肤表面的组织细胞及各种分泌物、微环境等共同组成的整体，它们维持着皮肤微生态平衡，在皮肤表面形成第一道生物屏障，具有重要的生理作用。越来越多的研究表明，诸多皮肤问题与皮肤微生态失调相关，例如以皮肤屏障功能受损为典型代表的特应性皮炎的严重程度与葡萄球菌属定殖增加以及表面微生物种类减少呈正相关；痤疮的发生与痤疮丙酸杆菌的增加以及皮肤表面有益微生物的减少有关。迄今为止，已经有不少产品通过调节皮肤微生态或提供促进皮肤有益共生菌生长的微环境等达到维持、改善或促进皮肤健康的目的。益生菌是指一类对宿主健康产生促进作用的微生物，在世界范围内被消费者接受，在医药、食品、保健品及农业等领域有着广泛的应用。近年来，许多功能性强的食品逐渐被应用到化妆品领域中，益生菌也不例外，为化妆品领域带来了新的发展方向，其通过调节皮肤微生态平衡从而达到维持或改善皮肤健康的目的。目前，益生菌类化妆品可以分为三类：(1)外用益生菌：在化妆品中，使用活的益生菌或益生菌的发酵萃取物，临床研究表明，外用益生菌可以通过影响皮肤微生物的组成，起到改善皮肤健康的作用。通过外用活益生菌，可以通过代谢产物、占位竞争等方式抑制皮肤表面有害菌的生长；通过外用益生菌的发酵萃取物，包含有多糖及氨基酸等，可以滋养皮肤、保护皮肤细胞等；(2)外用益生元：益生元是指可以被皮肤共生菌吸收的特定营养物质，可以促进皮肤共生菌的繁殖和生长，利于外用益生菌在皮肤表面的定殖，从而利于宿主皮肤健康；(3)益生菌酸奶类化妆品，如用益生菌酸奶制作的面膜，它含有多种氨基酸和维生素，起到滋养皮肤的作用。目前，与食品中添加活益生菌不同，在化妆品中大多数使用的是益生菌的碎片或萃取物，虽然对皮肤起到重要的生理功能，但要实现足够的抑制皮肤表面有害菌的生长繁殖和分泌胞外多糖保护皮肤等的功效，还需要在化妆品中添加“足量的”和“活的”益生菌。然而，益生菌对外界的不利环境非常敏感，氧气、温度和湿度等对益生菌的存活有很大影响，环境变化可导致其在生产、运输和销售过程中活菌数大幅减少。此外，当益生菌输入到皮肤表面时，容易受到皮肤分泌物的影响，难以保持足够的活益生菌定殖于皮肤，从而不利于发挥护肤作用。微囊化技术是一种包埋益生菌的有效手段，其采用天然或合成的高分子材料为囊材，通过化学、物理等方法将活性物质包裹起来，形成的微型胶囊。将益生菌微囊化之后，能在一定程度上使其与外界环境隔离，提高其对不利环境的耐受性，提高贮存过程中的稳定性，从而使益生菌获得较高的存活率。中国专利cn104856924b公开了“一种外用益生菌微胶囊的制备方法”，其特征在于利用海藻酸钠和葛仙米提取液对双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌进行了微胶囊化包埋，获得了湿胶囊，其主要缺点在于：囊材为海藻酸钠和葛仙米提取液，成分较单一，且葛仙米提取液成分不明确；微囊化过程采用单层包埋，微囊骨架过于疏松，后期经过口服或者在贮存过程中，微囊容易破裂，导致菌体泄漏到微囊外部；该专利的产品以湿胶囊的形式存在，不利于微囊后期的保存。中国专利cn106727263a公开了“皮肤微生态改善制剂及其制备方法”，其特征在于将益生菌粉、益生菌发酵液及常规助剂进行压片，得到了益生菌片，具有保湿、柔肤等功能，其缺点在于：益生菌对外界的不利环境非常敏感，且未经过包埋，当益生菌输入到皮肤表面时，容易受到皮肤分泌物的影响，难以保持足够的活益生菌定殖于皮肤；此外，该专利只研究了该益生菌片在室温、贮存温度下30天内的益生菌存活率，保质期过短，不能说明该产品中益生菌的稳定性。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供了一种益生菌微囊及其制备方法，技术方案具体如下：获得混合菌悬液；将益生元、天然多聚物、海藻酸钠加入所述混合菌悬液中混合，经乳化和一次固化步骤，形成初级微囊；将所述初级微囊置于壳聚糖溶液中二次固化。具体地，所述混合菌悬液包括鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和/或罗伊氏乳杆菌。具体地，所述益生元包括低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖或菊糖中的一种或多种。具体地，所述天然多聚物包括透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸、小核菌胶的一种或多种。进一步地，所述乳化为在大豆油中乳化。进一步地，所述一次固化为用氯化钙溶液进行固化。本发明还提出了如前任一制备方法制得的益生菌微囊。本发明还提出了一种益生菌微囊，包括：囊芯，包括益生菌和益生元；第一囊材，包括天然多聚物和海藻酸钠；第二囊材，包括壳聚糖。本发明还提出了如前所述的益生菌微囊经冷冻干燥制得的益生菌微囊冻干粉。本发明还提出了如前任一所述的益生菌微囊在保湿、祛痘产品中的应用，例如可以是具有保湿、祛痘作用的化妆品。本发明还提出了一种化妆品，所述化妆品包括如前所述益生菌微囊的或益生菌微囊冻干粉。其中，由于本发明的微囊或冻干粉具有良好的稳定性，可与溶媒搭配直接使用或作为化妆品成分应用于化妆品领域。进一步地，本发明提出的益生菌微囊化冻干粉的制备方法，技术方案如下：(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵液按照体积比混合均匀，离心后获得湿菌泥，无菌生理盐水洗涤2次，并用无菌生理盐水稀释得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：将益生元、天然多聚物、海藻酸钠加入到上述混合菌悬液中，混合均匀形成胶体溶液；将该胶体溶液加入到大豆油中乳化，然后加入固化液，形成初级微囊；将初级微囊置于壳聚糖溶液中进一步固化，用无菌生理盐水洗涤3次，获得皮肤益生菌微囊；(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊经过预冻、真空冷冻干燥，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。进一步地，鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌扩大培养时，发酵温度为30℃-37℃，发酵过程中控制ph为6.0-7.0，发酵周期为48h-60h。进一步地，将各益生菌发酵液按照体积比1份：1/4-3份：1/2-4份混合均匀，8000rpm-12000rpm，离心10min-20min，获得湿菌泥，并用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液。进一步地，在混合菌悬液中添加益生元、天然多聚物、海藻酸钠，无菌条件下，150rpm-250rpm搅拌20min-30min至均匀，得胶体溶液。胶体溶液中，益生元的浓度为1％-5％，海藻酸钠的浓度为1％-10％，天然多聚物的浓度为0.01％-1.5％。进一步地，所述益生元可包括低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖或菊糖的一种或多种任意比例的组合。所述天然多聚物为透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸、小核菌胶一种或多种任意比例的组合。可选地，所述透明质酸浓度为0.05％-1.5％，所述银耳多糖浓度为0.05％-1.0％，所述聚谷氨酸为0.05％-0.8％，所述小核菌胶为0.01％-0.1％进一步地，将胶体溶液缓慢加入到大豆油，大豆油中吐温80的浓度为0.5％-1.0％，胶体溶液与大豆油的比例为1:2-1:5，无菌条件下200rpm-600rpm，乳化15min-30min，得乳化液。进一步地，将固化液加入到乳化液中，乳化液与固化液的体积比为1:1-1:4，固化液为氯化钙，浓度为1％-3.5％，无菌条件下200rpm-600rpm，固化10min-20min，得初级微囊。进一步地，将初级微囊置于壳聚糖溶液中进一步固化5min-15min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于水杨酸中得到，浓度为1％-10％，溶解调节壳聚糖溶液的ph为6.0。进一步地，皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3h-6h；真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-40℃至-60℃，真空度1pa-8pa，冷冻干燥24h-36h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。本发明的技术方案获得的有益效果如下：1.本发明通过对皮肤益生菌微胶囊化，进行双层包埋，克服了化妆品中益生菌比较脆弱、容易失活的缺点，提高了益生菌耐受不利环境的能力，延长了益生菌化妆品的保质期；2.本发明中采用了透明质酸、聚谷氨酸、银耳多糖和/或小核菌胶天然多聚物材料，这些材料具有双重功效：(1)具有无毒、成膜性好、生物相容性等优点，可作为益生菌微囊化的囊材使用，且多种天然多聚物复合使用，具有包埋效果更显著的特点；(2)和益生菌协同使用，具有良好的保湿、祛痘、维持皮肤微生态平衡的护肤效果；3.本发明中添加了低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖和/或菊糖等益生元生长促进因子，利于益生菌在皮肤中的定殖与繁殖生长，使其更好的发挥护肤作用。具体实施方式以益生菌为活性成分的化妆品中，许多仅仅是直接添加益生菌或益生菌的代谢产物，由于益生菌未经过包埋，在贮存和使用过程中容易失活，具有难以保持足够的活益生菌定殖于皮肤，继而发挥护肤功效的问题；而且，一些对益生菌的包埋技术中，还是存在包埋材料单一、包埋率及益生菌存活率不够理想的问题。有鉴于此，本发明提供了新的皮肤益生菌微囊化或其冻干粉及其制备方法。除特别指明，本发明的原料或试剂均可商业获得或通过现有技术方式获得。本发明实施例中部分材料如下：低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、菊糖来自保龄宝生物股份有限公司；透明质酸(200-1000kda)、聚谷氨酸(800-1500kda)、银耳多糖(50-200kda)、小核菌胶(2500-3000kda)来自华熙生物科技股份有限公司；海藻酸钠来自青岛明月海藻集团有限公司；壳聚糖来自浙江金壳药业股份有限公司。下面结合具体实施实例对本发明做进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。实施例1(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为30℃，发酵过程中控制ph为6.0，发酵周期为48h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1/4份：1/2份混合均匀，8000rpm，离心10min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1％菊糖、1.0％银耳多糖、1％海藻酸钠，无菌条件下，150rpm搅拌20min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:2缓慢加入到大豆油(含有0.5％吐温80)，无菌条件下200rpm，乳化15min，得乳化液；将1％氯化钙溶液按照体积比为1:1加入到乳化液中，无菌条件下200rpm固化10min，得初级微囊；将初级微囊置于1％壳聚糖溶液中(壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于水杨酸中得到，浓度为1％-10％，溶解调节壳聚糖溶液的ph约为6.0，下同)进一步固化5min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为银耳多糖、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为菊糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-40℃，真空度1pa，冷冻干燥24h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例2(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为37℃，发酵过程中控制ph为7.0，发酵周期为60h；各益生菌发酵液按照体积比1份：3份：4份混合均匀，12000rpm，离心20min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加5％低聚半乳糖、0.05％聚谷氨酸、10％海藻酸钠，无菌条件下，250rpm搅拌30min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:5缓慢加入到大豆油(含有1.0％吐温80)，无菌条件下600rpm，乳化30min，得乳化液；将3.5％氯化钙溶液按照体积比为4:1加入到乳化液中，无菌条件下600rpm固化20min，得初级微囊；将初级微囊置于10％壳聚糖溶液中进一步固化15min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为聚谷氨酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻6h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-60℃，真空度8pa，冷冻干燥36h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例3(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、0.075％小核菌胶、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为小核菌胶、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例4(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为31.5℃，发酵过程中控制ph为7.0，发酵周期为58h；各益生菌发酵液按照体积比1份：3份：4份混合均匀，8000rpm，离心20min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1.75％低聚半乳糖、0.4％透明质酸、8％海藻酸钠，无菌条件下，250rpm搅拌22min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.65％吐温80)，无菌条件下500rpm，乳化15min，得乳化液；将1％氯化钙溶液按照体积比为3:1加入到乳化液中，无菌条件下500rpm固化12min，得初级微囊；将初级微囊置于3％壳聚糖溶液中进一步固化13min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3.5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-55℃，真空度1pa，冷冻干燥24h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例5(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为35℃，发酵过程中控制ph为6.8，发酵周期为50h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1/4份：2份混合均匀，9000rpm，离心13min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加4％低聚异麦芽糖、0.8％聚谷氨酸、2.5％海藻酸钠，无菌条件下，180rpm搅拌28min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:2缓慢加入到大豆油(含有1.0％吐温80)，无菌条件下300rpm，乳化28min，得乳化液；将3％氯化钙溶液按照体积比为1.5:1加入到乳化液中，无菌条件下300rpm固化18min，得初级微囊；将初级微囊置于8％壳聚糖溶液中进一步固化8min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为聚谷氨酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚异麦芽糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-42℃，真空度6.5pa，冷冻干燥30h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例6(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为37℃，发酵过程中控制ph为6.0，发酵周期为52h；各益生菌发酵液按照体积比1份：2份：1/2份混合均匀，11000rpm，离心18min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加5％低聚果糖、0.8％银耳多糖、1％海藻酸钠，无菌条件下，220rpm搅拌20min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:4缓慢加入到大豆油(含有0.9％吐温80)，无菌条件下450rpm，乳化18min，得乳化液；将3.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下450rpm固化16min，得初级微囊；将初级微囊置于10％壳聚糖溶液中进一步固化12min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为银耳多糖、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4.5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-58℃，真空度3.5pa，冷冻干燥28h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例7(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为30℃，发酵过程中控制ph为7.0，发酵周期为60h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1份：1份混合均匀，10000rpm，离心10min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1％低聚半乳糖、2％低聚异麦芽糖、0.05％透明质酸、0.1％小核菌胶、2％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌20min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:4缓慢加入到大豆油(含有0.7％吐温80)，无菌条件下300rpm，乳化20min，得乳化液；将2％氯化钙溶液按照体积比为2:1加入到乳化液中，无菌条件下200rpm固化10min，得初级微囊；将初级微囊置于1％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、小核菌胶、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖、低聚异麦芽糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-45℃，真空度4pa，冷冻干燥30h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。实施例8(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为35℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为50h；各益生菌发酵液按照体积比1份：3份：2份混合均匀，12000rpm，离心18min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1％低聚半乳糖、1.5％低聚果糖、1％低聚异麦芽糖、1.5％菊糖、0.2％透明质酸、0.05％银耳多糖、0.5％聚谷氨酸、0.05％小核菌胶、1％海藻酸钠，无菌条件下，250rpm搅拌23min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:5缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下500rpm，乳化18min，得乳化液；将3.5％氯化钙溶液按照体积比为3:1加入到乳化液中，无菌条件下500rpm固化18min，得初级微囊；将初级微囊置于8％壳聚糖溶液中进一步固化12min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸、小核菌胶、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊芯为低聚半乳糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、菊糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻3.5h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度6pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例1(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、0.075％小核菌胶、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，囊材为小核菌胶、海藻酸钠，囊心为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例2(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为低聚果糖和益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例3(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加1.5％透明质酸、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为透明质酸、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例4(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例5(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚果糖、1.5％胶原、1％明胶、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为明胶、胶原、海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌、低聚果糖。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例6(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％低聚木糖、小核菌胶0.075％、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌、低聚木糖。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。对比例7(1)皮肤益生菌的获得：将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌分别扩大培养，发酵温度为33℃，发酵过程中控制ph为6.5，发酵周期为55h；各益生菌发酵液按照体积比1份：1.5份：2份混合均匀，10000rpm，离心15min，获得湿菌泥，用无菌生理盐水洗涤2次，然后用无菌生理盐水将湿菌泥稀释至108cfu/ml，得混合菌悬液；(2)皮肤益生菌微囊化：上述混合菌悬液中添加2.5％大豆低聚糖、小核菌胶0.075％、5％海藻酸钠，无菌条件下，200rpm搅拌25min至均匀，得胶体溶液；将胶体溶液按照体积比1:3缓慢加入到大豆油(含有0.8％吐温80)，无菌条件下400rpm，乳化22min，得乳化液；将2.5％氯化钙溶液按照体积比为2.5:1加入到乳化液中，无菌条件下400rpm固化15min，得初级微囊；将初级微囊置于5％壳聚糖溶液中进一步固化10min，用无菌生理盐水洗涤3次，得皮肤益生菌微囊，所述的皮肤益生菌微囊，第一层囊材为海藻酸钠，第二层囊材为壳聚糖，囊心为益生菌、大豆低聚糖。(3)冻干粉的制备：上述皮肤益生菌微囊于-40℃下预冻4h，真空冷冻干燥过程中，冷冻温度：-50℃，真空度5pa，冷冻干燥33h，获得皮肤益生菌微囊化冻干粉。皮肤益生菌微囊化冻干粉包埋率及活菌数测试实验方法：分别将实施例和对比例制得的皮肤益生菌微囊化冻干粉1g置于9ml溶媒液(氯化钠0.9％，1％水杨酸，ph5.5-6.5)中，于37℃恒温水浴震荡30min后，将混悬液梯度稀释，采用平板菌落计数法进行活菌计数，将所得活菌数乘以皮肤益生菌微囊化冻干粉的总重量为n0，微胶囊化前的混合菌悬液中的活菌数记为n1，包埋率计算公式如下：包埋率(％)＝n0/n1×100％活菌数(cfu/g)：1g皮肤益生菌微胶囊冻干粉中所包埋的活菌数。实验结论：从表1可知，本发明制得的皮肤益生菌微囊化冻干粉具有良好的包埋率。通过分析各实施例与对比例1，这说明了海藻酸钠和壳聚糖的双层包埋作用，克服了单层包埋微囊疏松的问题；通过对比各实施例与对比例2可知，天然多聚物，如透明质酸、银耳多糖、聚谷氨酸和/或小核菌胶，在包埋益生菌时的使用，能与海藻酸钠、壳聚糖发挥协同作用，显著提高包埋率；通过对比各实施例和对比例3、对比例4、对比例5可知，在包埋益生菌时，益生元、天然多聚物、海藻酸钠能和壳聚糖发挥协同作用，利于包埋率的提高。表1皮肤益生菌微囊化冻干粉包埋率及活菌样品包埋率(％)活菌数(cfu/g)实施例1896.61×109实施例2919.75×109实施例3961.54×1010实施例4919.08×109实施例5908.23×109实施例6941.36×1010实施例7886.42×109实施例8921.15×1010对比例1305.81×108对比例2441.05×109对比例3523.88×109对比例4357.04×108对比例5482.76×109对比例6387.81×108对比例7409.50×108皮肤益生菌微胶囊冻干粉存活率测试实验方法：上述实施例和对比例制得的皮肤益生菌微囊化冻干粉进行稳定性实验，各样品在室温条件下保藏0个月、1个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月，于不同时间点，取样测定样品中益生菌活菌数，每样品3平行，活菌数计方法同包埋率测定计数方法。实验结论：由表2可知，本发明实施例获得的皮肤益生菌微囊化冻干粉在室温贮存过程中，较对比例，益生菌具有良好的稳定性，24个月后，益生菌存活率在70％以上；相对的，对比例制备的益生菌微囊化冻干粉，24个月后，益生菌存活率较差，约为10％-30％。表2皮肤微囊化冻干粉在室温贮存过程中的存活率功效测试a.保湿功效实验方法：选择160名年龄段在30-50岁的皮肤干燥的志愿者(皮肤含水量小于10％)，将上述志愿者随机分为空白对照组，实施例组1-8组，对比例组1-7组，每组10人。受试者统一清洁双手前臂内侧，自然干燥30min后，在双手前臂内侧分别选取4cm2的区域作为受试区，实施例组前臂内侧涂抹各实施例皮肤益生菌微囊化冻干粉溶媒液1.0ml(每1.0ml溶媒含有皮肤益生菌微囊化冻干粉0.5mg)，对比例组前臂内侧涂抹各对比例皮肤益生菌微囊化冻干粉溶媒液1.0ml(每1.0ml溶媒含有皮肤益生菌微囊化冻干粉0.5mg)，分别涂抹后于0.5h、1h、3h、6h时间点测试受试者前臂内侧受试区的皮肤含水量变化，空白对照组前臂内侧不涂抹护肤品。取受试者双手前臂内侧受试区的皮肤含水量的平均值作为该受试者的皮肤含水量的测试结果，再取各组受试者的皮肤含水量测试结果的平均值作为该组受试者皮肤含水量的测试结果。实验结论：通过表3可知，空白对照组中志愿者皮肤中的含水量变化不明显，使用供试品6h后，实施例组和对比例组志愿者的皮肤含水量均有所提高，但通过分析，前者志愿者的皮肤含水量明显高于后者，这说明本发明制备的皮肤益生菌微囊化冻干粉具有良好的保湿功效。表3受试者皮肤含水量测试结果组别0.5h1h3h6h空白对照30.7132.1628.6126.31实施例151.5046.4843.7539.45实施例254.3550.8947.7845.53实施例361.5257.7252.3350.67实施例454.5251.4346.2144.60实施例552.5149.2046.4141.36实施例656.1851.5749.8246.62实施例753.7250.5148.9543.55实施例859.8255.1150.2448.76对比例145.1741.7836.4529.13对比例247.2142.4537.2332.45对比例350.4444.1839.8733.28对比例442.5640.9235.1628.45对比例549.1943.3240.6534.18对比例641.3537.5634.1327.12对比例740.7136.6333.3426.95b.祛痘功效实验方法：选择170名面部皮肤明显有痘痘的志愿者，将上述志愿者随机分为空白对照组(不使用任何祛痘产品)，实施例组1-8组，对比例组1-7组，市售祛痘产品组，每组10人，分别长期试用相对应受试样品，测试周期为28天。受试者早晚洁面后，取适量受试样品涂于面部，特别是痘痘部位，轻轻按摩至吸收。评价方法：通过皮肤面部分析仪和面部图像分析软件对受试者使用前和使用后进行拍照分析，计算痘痘的减少量；若减少80％或以上，则为优良；若减少60％-80％，则为良好；若减少40％-60％，则为较好；若减少40％以下，则为较差。实验结论：通过表4可知，本发明实施例中的皮肤益生菌微囊化冻干粉较对比例、空白对照及市售祛痘产品，具有明显的祛痘效果。表4受试者祛痘测试结果样品痘痘减少量祛痘功效空白对照30％较差市售祛痘产品65％良好实施例171％良好实施例282％优良实施例388％优良实施例483％优良实施例575％良好实施例691％优良实施例773％良好实施例886％优良对比例133％较差对比例248％较好对比例353％较好对比例438％较差对比例550％较好对比例635％较差对比例737％较差尽管以上对本申请的实施方案进行了描述，但本申请并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本申请要求保护之列。当前第1页1 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